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產(chǎn)品名稱:
原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293Ad5
產(chǎn)品型號(hào):
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  原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293Ad5的詳細(xì)資料:

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產(chǎn)品名稱

原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293Ad5

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

貨號(hào)

EY-X63620

細(xì)胞名稱  人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293Ad5
形態(tài)特性: 上皮樣;多角

生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)

特征特性: 293細(xì)胞是由腺病毒5型(Ad5)DNA轉(zhuǎn)化原代人胚腎獲得的細(xì)胞系。該細(xì)胞對(duì)人的腺病毒尤其敏感,能受納高水平的腺病毒DNA。含有5型腺病毒的基因,且能高效表達(dá)。此外,293細(xì)胞的染色體數(shù)目以亞三倍體(hypotriploid)占多數(shù),主流數(shù)為64條(30%),高倍體為4.2%。

培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代

傳代情況: C35

凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè): 陰性
?
產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 
培養(yǎng)操作步驟
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí); 
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理; 
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞,以0.25%消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞;MMHRL1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Sagittula stellata Gonzalez et al.細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;1G9 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Escherichia coli (Migula) Castellani and Ch ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;1C1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;1B6 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Phoma glomerata (Corda) Wollenweber et Hoch ..細(xì)胞名稱: 兔正常食管上皮細(xì)胞;RNLEC/HL-030RabbitNormalEsophagealEpithelialCellsRNEEC/HL-030 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human skin細(xì)胞名稱: 人肺腺癌細(xì)胞系;ZLC-001 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Gibberella fujikuroi var.moniliformis (W ..細(xì)胞名稱: 人食管鱗癌細(xì)胞系;ZEC-134 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;XA272-919 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

freeze-dried細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;XA272-907 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Gaertneriomyces semiglobiferus Uebelmesser ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;XA272-917 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;XA272-918 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Acanthamoeba polyphaga (Puschkarew) Page細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;XA272-915 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Pectobacterium cypripedii (Hori) Brenner et ..細(xì)胞名稱: MAL基因敲除鼠舌鱗癌細(xì)胞系;Mca-T-MAL MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Mus musculus, mouse細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;XA272-908 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

Homo sapiens, human細(xì)胞名稱: 人內(nèi)膜癌細(xì)胞系;ZJB-ENC1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS

freeze-dried細(xì)胞名稱: 人胰腺癌細(xì)胞系;BxPC-3M8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293Ad5人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒β-EPRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒β-EPRELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒βGALELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒βGALELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人二級(jí)淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)ELISA試劑盒βGDELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA試劑盒βGDELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒β-glucosidaseELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人白細(xì)胞分化抗原30(CD30)ELISA試劑盒β-HCGELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞 293Ad5
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