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淺談減少E2定量elisa 試劑盒實(shí)驗(yàn)誤差的小竅門

點(diǎn)擊次數(shù):688次 更新時間:2020-07-17

   E2定量elisa 試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。下文來講講elisa試劑盒在使用時的安全事項(xiàng)。

  使用E2定量elisa 試劑盒的安全事項(xiàng):
  1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
  2、應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
  3、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
  4、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  5、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
  6、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  7、洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
  8、底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
  9、加入elisa試劑盒的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
  10、按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
  在日常的E2定量elisa 試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中,難免會遇到一些誤差,這些誤差有偶然誤差、過失誤差、系統(tǒng)誤差,而一個小小的誤差主意能夠影響到實(shí)驗(yàn),那么怎樣才能縮小實(shí)驗(yàn)誤差呢?下面主要就簡單介紹一下吧。
  1、檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
  2、使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。
  3、評估試劑的實(shí)用性,試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。
  4、仔細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
  5、洗滌*,如若洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。
  6、嚴(yán)控反應(yīng)時間,反應(yīng)時間過長,酶失活;反應(yīng)時間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
  7、注意試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。
  8、加樣要準(zhǔn)確、快速。如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,E2定量elisa 試劑盒尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。
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